蛋白质提纯的一般方法

chemytwei

1.根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质
   解离成两性离子，其净电荷为零，此时环境的pH值即为该蛋白质的等电点。在等电点时蛋白质性质比较稳定，其物理性质如导电性、溶解度、粘度、渗透压等皆最小，因此可以利用蛋白质等电点时溶解度最小的特性来制备或沉淀蛋白质。
2.根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质
   蛋白质的一个主要特点是分子大，而且不同种类的蛋白质分子大小也不相等。由此可以用凝胶过滤法，超滤法、离心法及透析法等将蛋白质与其它小分子物质分离，也可将大小不同的蛋白质分离。
3.根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质
   蛋白质的溶解度受溶液的pH、离子强度、溶剂的电解质性质及温度等多种因素的影响。在同一特定条件下，不同的蛋白质有不同的溶解度，达到分离的目的。盐溶与盐析，结晶，低温有机溶剂沉淀法
4根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质
  离子交换剂作为一种固定相，本身具有正离子或负离子基团，它对溶液中不同的带电物质呈现不同的亲和力，从而使这些物质分离提纯。
  蛋白质、多肽或氨基酸具有能够离子化的基团。
  对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤维和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶为骨架的离子交换剂。主要是取得其有较大的蛋白质吸附容量、较高的流速和分辨力。
5.根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质
  蛋白质上有疏水区，它们主要由酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸等非极性的侧链密集在一起，并暴露于分子表面。这些疏水区能够与吸附剂上的疏水性基团结合，在通过降低介质的离子强度和极性等方法将蛋白质洗脱下来。
6根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质逆流分配色谱
7.根据蛋白质受物理、化学等作用因素的影响来纯化蛋白质。
  蛋白质易受pH、温度、酸碱、金属离子、蛋白质沉淀剂，络合剂等的影响，用于各种蛋白质都存在差异，可利用这种差异来分离纯化蛋白质
8根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质
   在蛋白质分离中，最广泛使用的吸附剂有结晶磷酸钙，磷酸钙凝胶，硅胶，皂土、沸石、硅藻土、活性白土、氧化铝以及活性炭等。
9.根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质
    SOD酶抗蛋白水解酶。