软骨组织核酸提取时样本如何处理？？？

封刀看海 · 发表于 2010-2-22 12:57:13

膝关节软骨细胞做PCR，需要提RNA,标本该如何处理？？

取的是大鼠膝关节的软骨组织，请问如何将膝关节上的软骨组织分离下来？要用手术刀切还是怎么办？？新手上路请指点谢谢！！！

josephe · 发表于 2010-2-22 13:57:42

这个好像确实是个难题，小不丁点的，不太好分离吧？

不过这个实验的目的是啥？

帮你找了一个文献，剩下的自己接着找吧。

封刀看海 · 发表于 2010-2-22 23:26:43

谢谢，要检测两个基因在OA中表达情况，看是否上调。

josephe · 发表于 2010-2-23 00:00:26

引用第2楼封刀看海于2010-02-22 23:26发表的 :
谢谢，要检测两个基因在OA中表达情况，看是否上调。

骨关节炎状态下软骨细胞内的某个基因表达变化？

说不上来，这种实验操作的可行性有多大。

首当其冲的是要得到单一的软骨细胞，尽量避免其它组织的污染。其次是RNA的提纯，最后是基因表达定量。

如果是软骨细胞特有的表达基因，那还相对好点，即便有其他组织污染，也不太要紧，变化总是来自这个软骨细胞。如果是一个没有细胞特异性的基因，那是绝对不能有其他污染的。否则的话，定量出来的鬼知道是哪个细胞的表达变化。

不搞这些的，太多的也说不上来了。大老粗只能在此祝你好运了。

封刀看海 · 发表于 2010-2-23 22:10:24

谢谢斑竹，的确有您说的那些顾虑，而且软骨内细胞成分很少，大部分是细胞基质，RNA提取难度很大，可实验已经开始了，只能硬着头皮做下去了，试验的可行性不好说，自己感觉不是很明朗，结果不好出啊，遇到困难时向大家求助了，希望这个版块越办越好！！好多解决大家遇到的问题！！！

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