弓形虫微线体蛋白1部分基因的克隆、测序及表达

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目的构建弓形虫ZS2株pWR450-1-微线体蛋白1(MIC1)原核表达重组质粒,对MIC1基因进行序列测定,并在不同大肠杆菌中表达.方法用 PCR技术从弓形虫ZS2株的基因组DNA中扩增编码MIC1的基因片段,酶切,连接,重组入pWR450-1表达载体,再经含氨苄培养基筛选、酶切、 PCR鉴定,进行序列测序后转化大肠杆菌TG-1、JM109(DE3)和DH5α.在不同菌体浓度及不同剂量异丙基-β-D-硫代半乳糖诱导下,用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定MIC1融合蛋白的表达.结果从ZS2株基因组DNA中扩增出特异的MIC1基因片段,克隆后获得pWR450- 1/MIC1重组质粒,测序结果表明,MIC1这部分基因与弓形虫RH株相应基因序列完全一致,高度保守.该基因可在不同大肠杆菌中表达相对分子质量约 70 000的融合蛋白.结论构建了弓形虫ZS2株pWR450-1-MIC1重组质粒,为研究MIC1的结构与功能奠定了基础.