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原理：
该总RNA纯化系统采用两种著名的RNA酶抑制剂，异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇，加上整个操作都在冰浴下进行,这样就能显著降低RNA的降解速率。GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用，将促使核蛋白复合体的解离,使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA，则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA进入水相，这样使其与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离。水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩。进一步将上述RNA沉淀复溶于GTC溶液中，接着用异丙醇进行二次沉淀，随后用乙醇洗涤沉淀，即可去除所有残留的蛋白质和无机盐，而RNA中如含无机盐,则有可能对以后操作中的一些酶促反应产生抑制。乙醇可以沉淀 RNA 和DNA，异丙醇可以沉淀 RNA 和 蛋白质。乙醇多洗几遍 可以去除 蛋白质的污染。 |
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发表于 2008-1-17 17:26:31
发表于 2008-1-17 17:30:02
