链霉菌实验操作手册(中文）

billkof

简明的链霉菌实验操作手册
第一章 培养基 抗生素 生长因子  3
常用抗生素及其使用浓度  3
LB（Luria-Bertani）培养基  3
LA  3
基本培养基（MM）  3
R5（1L）链霉菌原生质体转化时用  4
YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）  4
TSBY （1L）（液体培养链霉菌）  4
MS培养基  5
2CMY培养基（用于井岗的接合转移）  5
YMS培养基（阿维，井岗产孢）  5
YD培养基  5
生长因子补充物的使用浓度  5
第二章 DNA基本操作  7
大肠杆菌质粒的抽提  7
酶连反应  7
DNxxx段凝胶回收  7
DNA纯化  9
E.coil总DNA的提取  9
链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进）  10
去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明）  10
AT克隆（详见说明书）  10
Southern  Blot  11
第三章 PCR及相关技术  13
PCR  13
PCR重组（详见《PCR技术实验指南》p429 重叠延伸技术）  14
PCR定点诱变（DpnI法）  14
第四章 基因片段转移技术  15
大肠杆菌CaCl2法制备感受态细胞及DNA转化  15
DNA转化  15
大肠杆菌质粒的快速检测  15
接合转移（详见英文《手册》249页）  16
链霉菌原生质体的制备  16
链霉菌原生质体的转化  17
PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化  17
第五章 RNA操作技术  19
链霉菌总RNA的抽提  19
链霉菌的RT-PCR（promega RT kit）  19
第六章 蛋白质基本操作技术  21
SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色  21
大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）：  21
链霉菌总蛋白抽提：  22
大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）：  22
Western Blot  23
第七章 遗传作图相关技术  25
链霉菌孢子悬液的制备  25
链霉菌中NF的证明  25
孢子杂交  25
在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因  25
第八章 其他技术  27
链霉菌菌种保藏  27
检测链霉菌淀粉酶的活性  27