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[【经验与求助】] 放线菌的分离和形态观察

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发表于 2007-11-23 20:10:19 | 显示全部楼层 |阅读模式
从土壤中分离放线菌
①制作高氏一号培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用。
  ②称取土壤10克,放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中,并加入10%酚10滴,以抑制细菌生长。振荡10分钟,制成10-1菌悬液。按照连续稀释分离法,进一步制成10-3菌悬液。
  ③用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液,注入平板培养基上,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。然后将培养皿倒置于25~30℃温箱中,培养7~10天,培养基上会出现微生物菌落。如果菌落的硬度较大,干燥致密,且与基质紧密结合,不易被针挑起,这就是放线菌菌落。
④挑取放线菌菌落,接种于斜面培养基上。
放线菌的形态观察
1.菌落形态观察
  (1)挑取泾阳链霉菌(“5406”放线菌)的少量孢子丝,点种于高氏一号培养基上,于37℃下培养3~5天。
  (2)观察菌落形态。注意菌落的形状、质地、颜色、表面及背面特征以及菌落的牢固程度等。
2.孢子丝形态观察
  ①将熔化的高氏一号培养基,倒入甲、乙两个无菌培养皿中。甲皿倒入15毫升,乙皿倒入5毫升,平置凝固待用。
  ②将盖玻片斜插在甲皿中的培养基上(每皿可插6片)。
  ③用小刀将乙皿中的培养基切成边长为3毫米左右的小方块。
  ④用接种铲铲取乙皿中的培养基小块,放在甲皿的盖玻片上,培养基小块的下方应与甲皿培养基接触。
  ⑤在盖玻片的培养基上接种少量放线菌菌种,于37℃下培养5天左右。
  ⑥取出带有培养基的盖玻片,在显微镜下观察,注意基内菌丝、气生菌丝和孢子丝的形状。
3.孢子形状观察
  ①取1盖玻片,在单菌落表面轻轻按压,使孢子贴附在盖玻片上。
  ②取1载玻片,在其中部滴加1滴美蓝染色液。
  ③将盖玻片带有孢子一面朝下,盖在载玻片的染色液上,用吸水纸吸去多余染色液。置于显微镜下,观察孢子形状和断裂方式。
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