B组轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达与抗体的制备

目的 克隆成人腹泻标本WH-1中B组轮状病毒组(group Brotavirus，GBRV)非结构蛋白NSP2基因，分析其核苷酸序列，比较与其它GBRV基因同源性，预测其mRNA二级结构、蛋白质二级结构。方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术，从成人腹泻标本WH-1中扩增GBRV NSP2基因，克隆载体pUCmT，对NSP2基因进行核苷酸序列分析。利用GeneBee软件比较与其它GBRV毒株NSP2基因同源性，Rnaviz2．0软件绘制NSP2基因的二级结构，PredictProtein软件分析NSP2蛋白结构。结果成人腹泻标本WH-1中GBRV非结构蛋白NSP2基因全长1007bD，与ADRV核苷酸序列的同源性达98％，与印度加尔各达分离株CAI-1达82％，与IDIR(鼠)同源性仅为79％。氨基酸序列与ADRV的同源性达98．4％，与CAL-1达97．7％，而与IDIR仅为89．0％。其mRNA折叠形成多达26个发卡环状结构。NSP2蛋白是由301个氨基酸残基组成的多肽，含有2个潜在的N-糖基化位点和多个磷酰化位点。结论成人腹泻标本WH-1中GBRV非结构蛋白NSP2基因和氨基酸序列与人GBRV有较高的同源性，而与动物中GBRV同源性相对较低，其中与ADRV的同源性最高，推测GBRV WH-1株与ADRV具有相同起源。