HE染色切片着色浅的原因及改进方法

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HE染色法是组织学与病理学常用的切片染色方法，HE染色切片标本是学生观察最多的一种切片标本。伊红(Eosin)，叉名曙红，呈红色粉末状，易溶于水和酒精，市面上有伊红Y和伊红B两种，常用者为伊红Y。一般采用O．5％～ 1％的水溶液作为染色液；也可用7O％ ～95％ 的酒精配成0．1％ ～1％的酒精伊红溶液。伊红溶液是一种酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。苏木精(Hematoxylin)，亦名苏木紫或苏木素，用于细胞核的染色。笔者最近在制作一些HE染色科研及教学切片中发现(染液和以前配方相同)，HE染色不易着色或着色不均，针对此现象，浅谈几点原因及解决方法。

  固定液的质量问题：常用的单纯固定液福尔马林(Formadehyde)．其自身也是一种还原剂，极易挥发，有强烈的刺激性气味。经福尔马林固定的组织细胞核染色较好。但胞浆着色差些。因为福尔马林久存易产生白色的“三聚甲醛”。即副醛．经氧化后变成甲酸而使溶液呈酸性。这样就会使固定的组织嗜染酸性，严重时可影响细胞核的嗜碱性染色。为了确保染色效果，经福尔马林固定时间较长的组织需经24h至48h流水冲洗，另外，可在备用的甲醛溶液中放人适量的碳酸镁或碳酸钙；或采用简便方法．在溶液中放人适量大理石或白色粉笔作为中和剂。除此之外．酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色色素，即福尔马林色素，这种色素既不溶于水又不溶于酒精，且影响染色效果。可采用Schriddc氏法或Verocay氏法将色素除掉。Sehridde氏法：25％ 氨水1ml，75％酒精200 m1．切片脱蜡下行至8O％酒精后人上述溶液浸泡半小时或稍长时问．然后流水冲洗再行染色。Verocay氏法：1％氨氧化钾水溶液1 rnl，8O％ 酒精1m1．切片脱蜡下行至8O％酒精后人上述溶液浸泡lOmin，再经7O％酒精入水后即可染色。

  染料纯度：不同厂家或同一厂家不同批号的染料产品，其纯度往往不一．为求得满意的效果，要按纯度调整染液中苏木精、伊红的含量。先求出校正率：校正率=原来染料纯度÷现在染料纯度。现在所需染料的量=原来染料所需的量X校正率。在配染液前将伊红、苏木索放人研钵中研蘑。

  因切片机反复使用，存在一些客观误差．人为操作造成主观误差，使切片不均匀，因此染色也不均匀．切片厚的部位染色深，切片薄的部位染色浅。在切片之前，应把刀磨快，通常使用磨刀机磨刀。一般磨一把刀应始终使用同一磨刀机，效果才最好．否则因受力改变，影响刀口或缩短寿命。磨好的刀应无缺痕，刀刃两侧倾角对称，切片时用力耍均匀，力争将误差减小到最小。