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MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan，后者的产量与活细胞数成正相关。formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长560nm进行比色。所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
优点：灵敏度高，操作简便，自动化。
缺点：影响因素多，重复性较差。文字
注意：MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护。
实验方法
一般我们是用96孔板来做细胞MTT实验。
1.细胞铺板
2.配制5mg/ml的MTT溶液（溶于0.1M PBS）,过滤(但是我实际上发现不过滤对实验也没有影响)。
3.每孔加入20 微升MTT溶液，37度孵育4小时后，小心吸出孔内培养基，可见孔内有蓝紫色结晶物。
4.每孔加入DMSO 150微升，振摇10min，490nm处用酶标仪测量每孔吸光度。
悬浮细胞和贴壁细胞的MTT法有差别,溶解剂要有所选择,我做悬浮细胞溶解剂用的是SDS-DMF(效果较好,不用弃上清),贴壁细胞的选择范围就广一些,你可以根据自己的具体实验选择.文字 |
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发表于 2007-9-10 00:33:32
