DNA的μg数与copies数之间如何换算

yujian623

根据阿佛加德罗常数，以及核酸的分子量、质量转换成摩尔浓度。
以Adeasy腺病毒质粒为例：
一个质粒 MW= 36820 bp X 2 X 330 = 2.43 x 107

一个质粒(1 copy)的质量 = 2.43 x 107 g/
6.023 x 1023个分子
= 4.03 x 10-17 g

计算出拷贝数（copies/ul）
梯度稀释制作标准品（大体积稀释10ul to 90ul）
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1A260 吸光度值=ds DNA50mg/ml
=ss DNA33mg/ml
=ss RNA40mg/ml
(OD260) x (dilution factor) x [33 或40或50]/ (1000) = mg/ml
MW = 克/摩尔
1 摩尔= 6.02 x 1023 摩尔分子(拷贝数)
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平均分子量:
dsDN!![/url]<font color=#ff0000>                     </font>(碱基数) x (660 道尔顿/碱基)
ssDN!![/url]<font color=#ff0000>                     </font>(碱基数) x (330 道尔顿/碱基)
ssRN!![/url]<font color=#ff0000>                     </font>(碱基数) x (340 道尔顿/碱基)
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拷贝数计算公式:
(6.02 x 10的23次拷贝数/摩尔) x (浓度g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml.
例：3000 碱基质粒， 浓度100 ng/ml ， MW = 3000 bp x 660 dalton/bp = 1.98 x 10的6次 daltons，1 mol = 1.98 x 10的6次 g.
(6.02 x 10的23次拷贝数/摩尔) x (1x 10的-7次克/微升) / (1.98 x 10的6次 克/摩尔) = 3 x 10的10次 copies/ml.
oligo’smg/ml) / MW x 10的6次 = mM