植物组织总RNA的制备：Trizol法

yujian623

一、材料、试剂和仪器

1 材料 植物根或叶
2 试剂
1） Trizol试剂（含酚、异硫氰酸胍和溶解剂等）
2）75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。
3 仪器 水浴锅，低温高速离心机

二、程序

1 将组织在液氮中磨成粉末后，再以50-100 mg组织加入1mL Trizol液，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10% 。
2 研磨液室温放置5min，然后以每1mL Trizol液加入0.2 mL的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15sec。
3 12000g 离心10min，取上层水相于一新的离心管，按每mL Trizol液加0.5 mL异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10min，12000g 离心10min。
4 弃去上清液，按每mL Trizol液加入至少1mL的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5min。
5 小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10min，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃助溶 10min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇中于-70℃保存。