液泡系的活体染色和细胞中过氧化物酶的定位

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原理
活体染色是指对生命有机体的细胞或者组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。目的在于显示生活细胞内的某些天然结构，同时不会影响细胞的正常生命活动和引起细胞死亡。活体染色技术可以用来研究生活状态下的细胞结构和生理、病理状态变化。液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，具有重要的功能。中性红（neutral red）是液泡的特殊染色剂，只将液泡染成红色。对于活细胞，细胞质和细胞核不会被染色。
细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或者棕色络合物，根据蓝色或者棕色的出现位置来显示细胞内过氧化物酶的存在。

仪器、材料和试剂
1）仪器和用具：显微镜、镊子、小烧杯、吸水纸、载玻片、盖玻片
2）材料：洋葱鳞茎
3）试剂
① Ringer溶液：NaCl 8.5g、CaCl2 0.12g、NaHCO3 0.20g、KCl 0.14g、Na2HPO4 0.01g、葡萄糖 2.0g，加蒸馏水至1000mL。
② 1％和1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50mL Ringer溶液，稍加热使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶暗处保存，防止氧化沉淀失去染色能力。临用前取1％中性红溶液1mL，加入29mL Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
③ 0.85％的生理盐水。
④ 联苯胺溶液：在0.85％的盐水中加入联苯胺至饱和为止，临用前加入20％H2O2，1滴/2mL。
⑤钼酸铵溶液：称取0.1g钼酸铵溶于100mL 0.85%生理盐水。

步骤
1.植物细胞液泡的活体染色
洋葱内表皮：撕取洋葱鳞茎内表皮，放在加有一滴1/3000的中性红染液的载波片上，染色10min，用吸水纸吸去中性红染液，换上蒸馏水，盖上盖玻片，显微镜观察，可见到被染成砖红色的中央大液泡。
黄豆根尖：
1）取一干净载玻片，滴一滴1/3000中性红染液；
2）用刀片将初生的黄豆根尖（约1－2cm长）切一纵薄片，置染液中，染8分钟；
3）用吸管吸蒸馏水滴在染液周围，使染液冲淡，吸去再换水使染液近无色；
4）用盖玻片盖在样品上，吸去多余水分；
5）观察：在高倍镜下，先观察分生区细胞，寻找染成红色的圆形液泡，这是初生的幼小液泡；由分生区向伸长区观察，在长方形细胞中寻找染色较浅，体积增大的液泡；在根毛区寻找体积更大的液泡，有的占据胞质大部分，将细胞核挤至一侧。

2. 细胞中过氧化物酶的定位
（1） 把洋葱根尖徒手切成20-40μm的薄片，再用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块；
（2）把上面两个材料浸在含有0.1％钼酸铵的0.85％盐水溶液10ml中5min（钼酸铵的作用是催化剂）；
（3）浸在10ml联苯胺溶液内5min以上，直到切片出现蓝色；
（4）用0.85%盐水10ml清洗3次，每次5min；
（5）将样品置于载波片上展开，盖上盖玻片，显微镜观察