HPLC资料

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高效液相色谱（HPLC）是一种使用专用仪器的分析工艺，用来定量、定性分离化学混合物的组分。样品被引入溶剂流径通路并通过填装有特殊材料的色谱柱得到分离。组分数据可以通过检测装置联合数据报告系统获得。这些过程所能承受的压强能够达到6,000psi。
HPLC系统的基本组成如下：溶剂瓶、泵、进样器、分析色谱柱、检测器、数据记录仪和废液瓶。其它的重要部件可加入这一基本组成中，包括：入口溶剂过滤器、泵后在线过滤器、柱前过滤器、保护柱、反压调节器和/或溶剂喷射系统。基本组成部分的功能简介如下：
溶剂瓶 溶剂瓶是HPLC系统的开端，它所存储的流动相携带着样品通过系统。溶剂需要用入口溶剂过滤器过滤以除掉任何可能引起系统敏感部件损坏的颗粒。
泵 溶剂由泵驱动流过系统。泵系统通常还包括内部泵密封，超过使用寿命它会慢慢分解。密封分解会释放出粒子到流路中，因此使用在线溶剂过滤器防止泵后部件的损坏非常重要。
进样器 系统中的下一个部件是进样器，通常也叫进样阀。进样阀安装有分析工作要求的合适尺寸的定量环，允许样品可以重复引入流径通路。因为进样阀通常使用转子密封，往往产生磨损颗粒，所以使用柱前过滤器防止阀和色谱柱的损坏非常重要。
分析型色谱柱 色谱柱紧跟在进样阀之后。溶剂携带着样品与色谱柱中的填料发生不同反应，样品分离主要在这里发生。保护柱通常安装在分析柱之前，用化学方法排除样品中可能污染主色谱柱的成分。
检测器 样品通过分析柱后，被分离的成分在到达废液瓶之前通过检测器的流通池，流通池中的样品成分引起检测器的电子反应，检测器将其数字化后送入数据记录仪。数据记录仪则负责分析和翻译数据。
反压调节器 反压调节器作为系统最后的保护部件，通常被安装在检测器之后。这种装置可以防止溶剂漏气，直到它们通过检测器。这一点非常重要，因为流通池中的气泡经常会干扰样品成分的检测。惰性气体喷射系统可以代替反压调节器，强迫溶剂外的未溶气体留在溶剂瓶内。为了最好的防止气泡干扰，可将喷射系统和反压调节器同时使用。
以上所述各个基本部件都需要配件将它们连成系统。

HPLC的日常维护
1．HPLC的日常操作条件：
◆ 温度：10—30℃，最好配备有恒温柱箱，使得色谱柱的温度保持恒定，对结果的精确性有很大的提高；
◆ 相对湿度<80％；
◆ 泵检测器都属于精密仪器，最好配备有稳压电源，防止电压的波动对仪器造成的损害。
2．泵的保养：  
◆  启动泵前一定要进行排气操作，避免泵的抽空运转；
◆  在加大流量和减小流量时，要循序渐进，避免一次性增加或减少流量幅度过大引起泵的不稳定；
◆  应尽量避免泵在很高的压力下长时间操作，如果泵出现压力明显高于正常值的情况，应尽快检查流路是否有堵塞情况，尽快排除；
◆  使用流动相尽量要清洁；
◆  溶剂过滤头要经常超生、清洗；
◆  更换流动相时要注意兼容，防止沉淀；
如果泵本身没有在线自清洗功能，则每次分析结束都应该用清水对柱塞密封进行清洗，防止磷酸盐结晶划伤柱塞密封。
3．进样阀的保养：
◆  每次分析结束后，要反复冲洗进样口和转子密封，防止样品中杂质的残留损害转子密封，也避免样品的交叉污染。
4． 柱的保养：
◆  柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；
◆  要注意流动相的脱气；
◆  避免使用高粘度的溶剂作为流动相；
◆  进样样品要提纯；
◆  分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；
◆  分析测定结束后，要用适当的溶剂来清洗柱；
◆  若长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；
5．检测器(UV)的保养：
  ◆ 紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。
◆  样品池要保养，经常冲洗。

如何选择毛细管柱：
长度 5-15m（短柱）：分离少于10个组分的简单样品。
  25-30m（中长柱）：分离10-50个组分的样品
  ≥50m（长柱）：分离多于50个组分或包含有难分离物质对的复杂样品。
内径0.53mm：具有类似填充柱的负荷量，总柱效远远超过填充柱。
       当达到相同的分离度时，0.53mm大口径柱的分析时间明显比填充柱快，适用于分析不太复杂的样品，是填充柱理想的替代柱。
    0.32mm：柱效稍低于0.25mm常规柱，负荷量则较常规柱高约60%，用特制注射针可做柱上进样。
0.25mm：最常用的内径规格，柱效较高，负荷量较低，必须分流进样，用于复杂多组分样品的分析。
   0.20mm：柱效高，负荷量低，流失较小，适合与质谱等高灵敏检测器连用。
膜厚 0.10-0.20um（薄液膜）：负荷量低，高温下流失较小，适合于高沸点化合物的分析，适用于配高灵敏检测器。
0.25-0.33um（标准液膜）：一般商品柱的标准液膜。
0.50-5.00um（厚液膜）：负荷量较高，在高温下流失较大，适宜于分析低沸点样品。

色谱图出现的各种问题和解决方法：
A、峰拖尾
原 因    解决方法
1、筛板阻塞    1、a、反冲色谱柱;  b、更换进口筛板
  c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷    2、填充色谱柱
3、干扰峰    3、a、使用更长的色谱柱
  b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误    4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应    a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更换色谱柱
B、峰前延
原 因    解决方法
1、柱温低    1、升高柱温
2、样品溶剂选择不恰当    2、使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载    3、降低样品含量
4、色谱柱损坏    4、见A1、A2
C、峰分叉
原 因    解决方法
1、 保护柱或分析柱污染图    1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相    2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
D、保留时间波动
原 因    解决方法
1、温控不当    1、调好柱温
2、流动相组分变化    2、防止变化（蒸发、反应等）
3、色谱柱没有平衡    3、每一次运行前用足够的时间平衡色谱柱
E、保留时间不断变化
原 因    解决方法
1、流速变化    1、重新设定流速
2、泵中有气泡    2、从泵中除去气泡