氨基酸含量测定方法

yujian623

样品预处理方法：盐酸水解法
盐酸水解影响因素：
1.样品纯度：碳水化合物可以干扰水解
2.盐酸浓度：6N，用量为蛋白质质量的500-5000倍
3.真空程度：空气可以使蛋、胱氨酸氧化，酪、组
氨酸破坏。  抽真空、充氮气
4.水解温度及时间：110℃水解22小时

具体步骤：
1. 样品必须粉碎60-80目筛，以保证取样均匀和水解效果。
2. 称样量一般控制50-100毫克，可根据样品粗蛋白质含量，确定大体称样量

样品的粗蛋白含量与称样量对比表
粗蛋白含量  称样量
谷物类
饼粕、浓缩料
鱼粉、玉米蛋白
羽毛粉、血粉  10-20℅
30-45℅
55-65℅
70-80℅  100 mg
80 mg
60 mg
50 mg

称量样品时注意用特定的小勺子取样，将样品送入水解管底部。称量并记录。操作时要戴手套，天平要求为1/10000天平。
3. 用可调定量加液器向已装有样品的水解管中加入6-8毫升的
6 mol/L的盐酸，注意先加入0.5毫升左右浸湿。
4. 抽真空减压后用丁烷喷灯灼烧封口。
5. 110℃烘箱中水解22小时。
6. 水解管中液体摇匀，滤纸（11cm*11cm）过滤于50毫升容量瓶中并用双蒸水定容至50毫升。
此步骤一定要注意润洗水解管三次以上，并每次滤纸上水已过滤至容量瓶后再加水过滤，保证水解管及滤纸上不残留氨基酸。
7. 摇匀后取1毫升于塑料离心管中，冻干机真空浓缩4-6小时至近干燥状态。
此步骤也可用其它仪器代替，只需要达到真空干燥就行。
8. 加入1毫升0.02 mol/L的盐酸于离心管中震荡均匀。
9. 14000rpm/min离心15分钟，吸上清液0.8毫升于氨基酸测定仪样品瓶，上机测试。


氨基酸分析仪：日立L-8800全自动氨基酸分析仪
分离柱：标准蛋白质水解法分离柱，可以分离18种氨基酸
分析方法：茚三酮染色法