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常用培养液和培养基

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发表于 2005-10-5 18:11:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
常用药品试剂和培养基的配制——培养液和培养基

(四)培养液 ,培养基
1、人造海水
配方一  
氯化钠          24.72克
氯化钾          0.67克
氯化钙        1.36克
氯化镁      4.66克
硫酸镁      6.29克
碳酸氢钠        0.18克
蒸馏水              加到1升
把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中,再加入碳酸氢钠,最后用蒸馏水稀释到1000毫升。
配方二  
氯化钠  45.0克         硫酸镁  0.1克
氯化镁  5.0克          氯化铁(1%溶液)  1滴
先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里,把此溶液逐滴加到上述溶液内,装瓶保存。
配方二  克诺普氏(Knop’s)溶液
硝酸钾  1克          硫酸镁  1克
磷酸二氢钾  1克         硝酸钙  3克
先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解,加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙,用20毫升蒸馏水溶解,加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀,在使用是必须摇动。
在以上溶液中加入蔗糖溶液(1~4%),能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。
3、植物无土培养液
配方  霍格伦德(Hoagland)和斯纳德(Snyder)液
硝酸钙  0.821克        硝酸钾  0.506克
磷酸二氢钾 0.136克        硫酸镁  0.120克
酒石酸铁  0.005克
把上述盐类溶解在少量蒸馏水里,然后稀释到1000毫升。

(五)培养基
1、细菌培养基
配方一  牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏  0.3克         蛋白胨  1.0克
氯化钠  0.5克         琼脂    1.5克
水    1000毫升
在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二  马铃薯培养基
取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。
配方四  根瘤菌培养基
葡萄糖  10克          磷酸氢二钾        0.5克
碳酸钙  3克          硫酸镁( ) 0.2克
酵母粉  0.4克          琼脂          20克
水  1000毫升          1%结晶紫溶液      1毫升
先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。
2、放线菌培养基
配方一  淀粉琼脂培养基(高氏培养基)
可溶性淀粉  2克        硝酸钾    0.1克
磷酸氢二钾  0.05克      氯化钠    0.05克
硫酸镁    0.05克      硫酸亚铁  0.001克
琼脂     2克        水     1000毫升
先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。
配方二  面粉琼脂培养基
面粉  60克          琼脂  20克
水    1000毫升
把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。
3、真菌培养基
配方一  萨市(Sabouraud’s)培养基
蛋白胨  10克         琼脂  20克
麦芽糖  40克         水  1000毫升
先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二  马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三  黄豆芽汁培养基
黄豆芽  100克          琼脂  15克
葡萄糖    20克          水  1000毫升
洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。
配方四  豌豆琼脂培养基
豌豆  80粒          琼脂  5克
水  200毫升
取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。
4、食用菌菌种培养基
配方一  马铃薯—蔗糖--琼脂培养基
20%马铃薯煮汁  1000毫升
蔗糖  20克          琼脂    18克
把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。
配方二  综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁  1000毫升
磷酸二氢钾  3克        硫酸镁  1.5克
葡萄糖    20克        维生素    10毫克
琼脂     18克
先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。
该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
(三)生理盐水
配方一  各种动物需用的生理盐水
哺乳类  需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到100毫升。
鸟类  需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类  需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
配方二  任氏(Ringer’s)生理盐水
氯化钠  6.5克      碳酸氢钠  0.2克
氯化钾  0.14克     磷酸二氢钠 0.01克
氯化钙  0.12克
先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中,混合后用蒸馏水稀释到980毫升。然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中,把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内,边滴、边搅拌,以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。
此溶液用于变温动物,尤其常用于两栖类。
配方三  乐氏(Locke’s)生理盐水
氯化钠  9.0克     碳酸氢钠  0.1~0.3克
氯化钾  0.42克     氯化钙    0.24克
把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解,混合后加蒸馏水到980毫升。把氯化钙溶解在20毫升蒸馏水里,逐滴加入上述溶液中。
以上溶液用于恒温动物,尤其常用于哺乳类。
(二)分离液
1、肌细胞分离液
配方一  马克凯郎(Maccallum)液
取1份浓硝酸、2份甘油、3份水,混合后就得到马克凯郎液。
把新鲜的肌肉组织小块(横纹肌、心肌和平滑肌)投入这种溶液里浸渍,分离时间需1~3日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。
配方二  氢氧化钾溶液
取35克氢氧化钾,放在100毫升蒸馏水中,加热,使它完全溶解后,在室温下冷却。
把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中,浸泡15~30分钟后,肌细胞便可分离。
2、上皮细胞分离液
配方一  福尔马林—氯化钾溶液
称取58.44克氯化钠,用蒸馏水溶解,再稀释到1000毫升,加入2毫升福尔马林。
这种溶液是很好的上皮细胞分离液,分离很迅速,而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块,放在此溶液里2小时即可分离,口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需3日左右。
配方二  水和氯醛溶液
称取5克水和氯醛,用蒸馏水溶解,再稀释到100毫升,就得到5%水合氯醛溶液。
从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块,投入以上溶液中,浸泡24~48小时。
3、神经细胞分离液
配方一  可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林—氯化钠溶液来分离神经细胞(见2)。
配方二  硼酸生理盐水溶液
在生理盐水溶液内加入一些硼酸,搅拌到不再溶解时为止,使成为饱和溶液。
把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。
4、植物茎细胞分离液
杰弗里氏(Jeffrey’s)液
取等量的10%铬酸溶液和10%硝酸溶液混合,成铬酸—硝酸溶液。
这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里,加热煮沸,冷却后再加热煮沸。这样重复几次,到材料全部沉于水底后,投入分离液内,分离时间是24~48小时。
5、植物根尖细胞分离液
配方一  盐酸—酒精溶液
在1份95%酒精中慢慢的加入1份浓盐酸,即成盐酸—酒精溶液,装瓶密闭保存。
把植物根尖部位截下一小段,投入以上溶液中分离。
配方二  4%盐酸溶液
配制4%盐酸溶液。
截下植物根尖部位,投入盛有4%盐酸溶液的小烧杯内,在60摄氏度温水中隔水温热1~2分钟,使根尖软而不酥,这时分离效果最好。
6、植物纤维分离液
取10克氢氧化钠(或氢氧化钾),溶解在90毫升水里,制成10%氢氧化钠(或氢氧化钾)溶液,放在瓶里密闭保存。
把植物茎纵切成细条,剪成小段后,投入分离液内。
7、植物细胞质壁分离液
配方一  30%蔗糖溶液
取30克蔗糖,溶解在70毫升蒸馏水里,装瓶备用。
配方二  5%氯化钠溶液
取5克食盐,溶解在95毫升蒸馏水里,装瓶备用。
配方三  5%硝酸钾溶液
取5克硝酸钾,溶解在95毫升蒸馏水里,装瓶备用。
(一)  反应剂
  1、检查葡萄糖试剂
配方一  本尼迪克(Benedict)溶液
(1) 在400毫升蒸馏水中溶解85克柠檬酸钠和50克无水碳酸钠。
(2) 在50毫升加热的蒸馏水中溶解8.5克硫酸铜。
把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中,边加边搅拌,如果产生沉淀,要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用(存放时间较久而产生沉淀是,取上层清液使用,不必重新配制)。
本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖,可测出0.15 ~0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时,如果未知物中有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
配方二 裴林(Fehling)溶液
(1)把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中。
(2)把125克氢氧化钾(钠)和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中。
上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时,使他们等量的混合,加入待测物的试管内,加热到沸腾。如果有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
2、检查淀粉的试剂
鲁哥氏(Lugol’s)溶液(碘液)
取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中,搅拌到溶解后,加入4克碘,等碘充分溶解,在加入80毫升蒸馏水,贮存在棕色试剂瓶内。
碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉,也用作染色剂,例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。
3、检查蛋白质的试剂
配方一  米伦(Millon)试剂
在60毫升浓硝酸(比重1.42)中溶解40克汞(水浴加温可助溶),溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释,静置澄清后,取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。
在待测物中加入少量米伦试剂,加热,如果有蛋白质,会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。
配方二  双缩尿试剂
分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液。
在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质,会出现紫色反应。
4、检查脂肪的试剂
苏丹Ⅲ(Ⅳ)酒精饱和溶液
取0.2克苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ),放入纯酒精中,加热,使它充分溶解,成为饱和酒精溶液,过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。
5、酸碱指示剂
配方一  酚酞试剂和试纸
酚酞试剂 取1克酚酞,溶解在100毫升60%的酒精溶液里,装在试剂瓶内密闭保存。
酚态试纸 取1克酚酞,溶解在100毫升95%酒精溶液里,加入00毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后,取出,放在无氨气影响处晾干。
酚泰试剂(试纸) pH值变色范围8.2~10,在酸性和中性溶液中都无色,再碱性溶液中呈深红色。
配方二  红蓝石蕊试纸
取市售石蕊1克,放在80毫升10%酒精溶液中搅拌,使它溶解,然后过滤。把滤液分成两份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸,到出现红色为止。另1份滴入稀氢氧化钠溶液,到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条,随后取出滤纸条,放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干,即的红、蓝两种石蕊试纸。
红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝,蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。
6、检查二氧化碳的试剂
检查二氧化碳的试剂,可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。
配方一  溴代麝香草酚蓝溶液
取0.1克溴代麝香草酚蓝,溶解在100毫升蒸馏水里,滴入少量0.1%氢氧化钾溶液,使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。
溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0(黄)~7.6(蓝)。待测物中如果有二氧化碳,会形成碳酸而使溶液变成黄色。
配方二  石灰水
在蒸馏水中加入生石灰(氧化钙),变加边搅拌,直到加入的生石灰不再溶解,呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后,倾出上层清液,用滤纸过滤,放在密闭瓶内保存。
如果测定的物质中有二氧化碳,会生成碳酸钙,使石灰水变浑浊。
7、检查细胞生活力的试剂
检查细胞有无生活力,可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液,这两种溶液各取1份混合,用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色,而使死细胞全部染成蓝色。
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