放线菌的分离和形态观察

yujian623

从土壤中分离放线菌
①制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
　　②称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。振荡10分钟，制成10-1菌悬液。按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。
　　③用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。然后将培养皿倒置于25～30℃温箱中，培养7～10天，培养基上会出现微生物菌落。如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。
④挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。
放线菌的形态观察
1.菌落形态观察
　　(1)挑取泾阳链霉菌（“5406”放线菌）的少量孢子丝，点种于高氏一号培养基上，于37℃下培养3～5天。
　　(2)观察菌落形态。注意菌落的形状、质地、颜色、表面及背面特征以及菌落的牢固程度等。
2.孢子丝形态观察
　　①将熔化的高氏一号培养基，倒入甲、乙两个无菌培养皿中。甲皿倒入15毫升，乙皿倒入5毫升，平置凝固待用。
　　②将盖玻片斜插在甲皿中的培养基上（每皿可插6片）。
　　③用小刀将乙皿中的培养基切成边长为3毫米左右的小方块。
　　④用接种铲铲取乙皿中的培养基小块，放在甲皿的盖玻片上，培养基小块的下方应与甲皿培养基接触。
　　⑤在盖玻片的培养基上接种少量放线菌菌种，于37℃下培养5天左右。
　　⑥取出带有培养基的盖玻片，在显微镜下观察，注意基内菌丝、气生菌丝和孢子丝的形状。
3.孢子形状观察
　　①取1盖玻片，在单菌落表面轻轻按压，使孢子贴附在盖玻片上。
　　②取1载玻片，在其中部滴加1滴美蓝染色液。
　　③将盖玻片带有孢子一面朝下，盖在载玻片的染色液上，用吸水纸吸去多余染色液。置于显微镜下，观察孢子形状和断裂方式。