常用培养液和培养基

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常用药品试剂和培养基的配制——培养液和培养基

（四）培养液 ,培养基
1、人造海水
配方一  
氯化钠          24.72克
氯化钾          0.67克
氯化钙        1.36克
氯化镁      4.66克
硫酸镁      6.29克
碳酸氢钠        0.18克
蒸馏水              加到1升
把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中，再加入碳酸氢钠，最后用蒸馏水稀释到1000毫升。
配方二  
氯化钠  45.0克         硫酸镁  0.1克
氯化镁  5.0克          氯化铁（1%溶液）  1滴
先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里，把此溶液逐滴加到上述溶液内，装瓶保存。
配方二  克诺普氏（Knop’s）溶液
硝酸钾  1克          硫酸镁  1克
磷酸二氢钾  1克         硝酸钙  3克
先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙，用20毫升蒸馏水溶解，加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。
在以上溶液中加入蔗糖溶液（1～4%），能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。
3、植物无土培养液
配方  霍格伦德（Hoagland）和斯纳德（Snyder）液
硝酸钙  0.821克        硝酸钾  0.506克
磷酸二氢钾 0.136克        硫酸镁  0.120克
酒石酸铁  0.005克
把上述盐类溶解在少量蒸馏水里，然后稀释到1000毫升。

（五）培养基
1、细菌培养基
配方一  牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏  0.3克         蛋白胨  1.0克
氯化钠  0.5克         琼脂    1.5克
水    1000毫升
在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二  马铃薯培养基
取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。
配方四  根瘤菌培养基
葡萄糖  10克          磷酸氢二钾        0.5克
碳酸钙  3克          硫酸镁（ ） 0.2克
酵母粉  0.4克          琼脂          20克
水  1000毫升          1%结晶紫溶液      1毫升
先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。
2、放线菌培养基
配方一  淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
可溶性淀粉  2克        硝酸钾    0.1克
磷酸氢二钾  0.05克      氯化钠    0.05克
硫酸镁    0.05克      硫酸亚铁  0.001克
琼脂     2克        水     1000毫升
先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
配方二  面粉琼脂培养基
面粉  60克          琼脂  20克
水    1000毫升
把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。
3、真菌培养基
配方一  萨市（Sabouraud’s）培养基
蛋白胨  10克         琼脂  20克
麦芽糖  40克         水  1000毫升
先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二  马铃薯糖琼脂培养基
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。
把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三  黄豆芽汁培养基
黄豆芽  100克          琼脂  15克
葡萄糖    20克          水  1000毫升
洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。
把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。
配方四  豌豆琼脂培养基
豌豆  80粒          琼脂  5克
水  200毫升
取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。
4、食用菌菌种培养基
配方一  马铃薯—蔗糖--琼脂培养基
20%马铃薯煮汁  1000毫升
蔗糖  20克          琼脂    18克
把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。
配方二  综合马铃薯培养基
20%马铃薯煮汁  1000毫升
磷酸二氢钾  3克        硫酸镁  1.5克
葡萄糖    20克        维生素    10毫克
琼脂     18克
先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。
该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
（三）生理盐水
配方一  各种动物需用的生理盐水
哺乳类  需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
鸟类  需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
两栖类  需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。
配方二  任氏（Ringer’s）生理盐水
氯化钠  6.5克      碳酸氢钠  0.2克
氯化钾  0.14克     磷酸二氢钠 0.01克
氯化钙  0.12克
先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到980毫升。然后取氯化钙溶解在20毫升蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内，边滴、边搅拌，以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。
此溶液用于变温动物，尤其常用于两栖类。
配方三  乐氏（Locke’s）生理盐水
氯化钠  9.0克     碳酸氢钠  0.1～0.3克
氯化钾  0.42克     氯化钙    0.24克
把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混合后加蒸馏水到980毫升。把氯化钙溶解在20毫升蒸馏水里，逐滴加入上述溶液中。
以上溶液用于恒温动物，尤其常用于哺乳类。
（二）分离液
1、肌细胞分离液
配方一  马克凯郎（Maccallum）液
取1份浓硝酸、2份甘油、3份水，混合后就得到马克凯郎液。
把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需1～3日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。
配方二  氢氧化钾溶液
取35克氢氧化钾，放在100毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。
把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中，浸泡15～30分钟后，肌细胞便可分离。
2、上皮细胞分离液
配方一  福尔马林—氯化钾溶液
称取58.44克氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到1000毫升，加入2毫升福尔马林。
这种溶液是很好的上皮细胞分离液，分离很迅速，而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块，放在此溶液里2小时即可分离，口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需3日左右。
配方二  水和氯醛溶液
称取5克水和氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到100毫升，就得到5%水合氯醛溶液。
从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块，投入以上溶液中，浸泡24～48小时。
3、神经细胞分离液
配方一  可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林—氯化钠溶液来分离神经细胞（见2）。
配方二  硼酸生理盐水溶液
在生理盐水溶液内加入一些硼酸，搅拌到不再溶解时为止，使成为饱和溶液。
把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。
4、植物茎细胞分离液
杰弗里氏（Jeffrey’s）液
取等量的10%铬酸溶液和10%硝酸溶液混合，成铬酸—硝酸溶液。
这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里，加热煮沸，冷却后再加热煮沸。这样重复几次，到材料全部沉于水底后，投入分离液内，分离时间是24～48小时。
5、植物根尖细胞分离液
配方一  盐酸—酒精溶液
在1份95%酒精中慢慢的加入1份浓盐酸，即成盐酸—酒精溶液，装瓶密闭保存。
把植物根尖部位截下一小段，投入以上溶液中分离。
配方二  4%盐酸溶液
配制4%盐酸溶液。
截下植物根尖部位，投入盛有4%盐酸溶液的小烧杯内，在60摄氏度温水中隔水温热1～2分钟，使根尖软而不酥，这时分离效果最好。
6、植物纤维分离液
取10克氢氧化钠（或氢氧化钾），溶解在90毫升水里，制成10%氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，放在瓶里密闭保存。
把植物茎纵切成细条，剪成小段后，投入分离液内。
7、植物细胞质壁分离液
配方一  30%蔗糖溶液
取30克蔗糖，溶解在70毫升蒸馏水里，装瓶备用。
配方二  5%氯化钠溶液
取5克食盐，溶解在95毫升蒸馏水里，装瓶备用。
配方三  5%硝酸钾溶液
取5克硝酸钾，溶解在95毫升蒸馏水里，装瓶备用。
（一）  反应剂
  1、检查葡萄糖试剂
配方一  本尼迪克（Benedict）溶液
（1） 在400毫升蒸馏水中溶解85克柠檬酸钠和50克无水碳酸钠。
（2） 在50毫升加热的蒸馏水中溶解8.5克硫酸铜。
把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如果产生沉淀，要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用（存放时间较久而产生沉淀是，取上层清液使用，不必重新配制）。
本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖，可测出0.15 ～0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时，如果未知物中有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
配方二 裴林（Fehling）溶液
（1）把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中。
（2）把125克氢氧化钾（钠）和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中。
上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时，使他们等量的混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
2、检查淀粉的试剂
鲁哥氏（Lugol’s）溶液（碘液）
取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解，在加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。
碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉，也用作染色剂，例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。
3、检查蛋白质的试剂
配方一  米伦（Millon）试剂
在60毫升浓硝酸（比重1.42）中溶解40克汞（水浴加温可助溶），溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。
在待测物中加入少量米伦试剂，加热，如果有蛋白质，会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。
配方二  双缩尿试剂
分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液。
在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。
4、检查脂肪的试剂
苏丹Ⅲ（Ⅳ）酒精饱和溶液
取0.2克苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ），放入纯酒精中，加热，使它充分溶解，成为饱和酒精溶液，过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。
5、酸碱指示剂
配方一  酚酞试剂和试纸
酚酞试剂 取1克酚酞，溶解在100毫升60%的酒精溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。
酚态试纸 取1克酚酞，溶解在100毫升95%酒精溶液里，加入00毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后，取出，放在无氨气影响处晾干。
酚泰试剂（试纸） pH值变色范围8.2～10，在酸性和中性溶液中都无色，再碱性溶液中呈深红色。
配方二  红蓝石蕊试纸
取市售石蕊1克，放在80毫升10%酒精溶液中搅拌，使它溶解，然后过滤。把滤液分成两份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸，到出现红色为止。另1份滴入稀氢氧化钠溶液，到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条，随后取出滤纸条，放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干，即的红、蓝两种石蕊试纸。
红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝，蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。
6、检查二氧化碳的试剂
检查二氧化碳的试剂，可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。
配方一  溴代麝香草酚蓝溶液
取0.1克溴代麝香草酚蓝，溶解在100毫升蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。
溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0（黄）～7.6（蓝）。待测物中如果有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。
配方二  石灰水
在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙），变加边搅拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后，倾出上层清液，用滤纸过滤，放在密闭瓶内保存。
如果测定的物质中有二氧化碳，会生成碳酸钙，使石灰水变浑浊。
7、检查细胞生活力的试剂
检查细胞有无生活力，可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液，这两种溶液各取1份混合，用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色，而使死细胞全部染成蓝色。