封刀看海 发表于 2010-2-22 12:57:13

软骨组织核酸提取时样本如何处理???

膝关节软骨细胞做PCR,需要提RNA,标本该如何处理??

取的是大鼠膝关节的软骨组织,请问如何将膝关节上的软骨组织分离下来?要用手术刀切还是怎么办??新手上路请指点谢谢!!!

josephe 发表于 2010-2-22 13:57:42

这个好像确实是个难题,小不丁点的,不太好分离吧?

不过这个实验的目的是啥?

帮你找了一个文献,剩下的自己接着找吧。

封刀看海 发表于 2010-2-22 23:26:43

谢谢,要检测两个基因在OA中表达情况,看是否上调。

josephe 发表于 2010-2-23 00:00:26

引用第2楼封刀看海于2010-02-22 23:26发表的 :
谢谢,要检测两个基因在OA中表达情况,看是否上调。

骨关节炎状态下软骨细胞内的某个基因表达变化?

说不上来,这种实验操作的可行性有多大。

首当其冲的是要得到单一的软骨细胞,尽量避免其它组织的污染。其次是RNA的提纯,最后是基因表达定量。

如果是软骨细胞特有的表达基因,那还相对好点,即便有其他组织污染,也不太要紧,变化总是来自这个软骨细胞。如果是一个没有细胞特异性的基因,那是绝对不能有其他污染的。否则的话,定量出来的鬼知道是哪个细胞的表达变化。

不搞这些的,太多的也说不上来了。大老粗只能在此祝你好运了。

封刀看海 发表于 2010-2-23 22:10:24

谢谢斑竹,的确有您说的那些顾虑,而且软骨内细胞成分很少,大部分是细胞基质,RNA提取难度很大,可实验已经开始了,只能硬着头皮做下去了,试验的可行性不好说,自己感觉不是很明朗,结果不好出啊,遇到困难时向大家求助了,希望这个版块越办越好!!好多解决大家遇到的问题!!!
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