免疫细胞化学常用缓冲液

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免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。
1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）
试剂： NaH2PO4•2H2O
Na2HPO4•12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）    0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4•12H2O 31.2g(或 NaH2PO4•H2O 27.6g)加二次水至1000ml溶解。
（2）    0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.•12H2O 71.632g（或 Na2HPO4•7H2O 53.6g或 Na2HPO4•2H2O 35.6g）加二次水至1000ml溶解。
（3）    0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4•12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
2．0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS）
试剂：0.2mol/L PB　　　　　　 50ml
NaCl 　　　　　　　　　8.5～9g(约0.15mol/L)
二次水 　　　　　　　　至1000ml
配制方法：称取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加二次水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。




3．Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液
试剂： NaH2PO4•H2O　　　　　　　3.31g
Na2HPO4•7H2O　　　　　　　33.77g
二次水 　　　　　　　　至1000ml
配制方法：同前
该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。
4．0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。
试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷) 　　60.57g
1N HCl　　　　　　　　　　 约420ml
二次水 　　　　　　　　　　至1000ml
配制方法：先以少量二次水（300～500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加二次水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。
5．Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered,Saline,TBS）
试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液　　　100ml
NaCl　　　　　　　　　　　　　　  3.5～9g(0.15mol/L)
二次水　　　　　　　　　　　　　　至1000ml
配制：先以二次水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液，最后加二次水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。
TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。
6．Tris-TBS(PBS)
试剂：Triton X-100 　　　　　　　　　　10ml(1%)或3ml(0.3%)
0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6）　　 1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)
NaCl　　　　　　　　　　　　　　 8.5～9g
二次水　　　　　　　　　　　　　　至1000ml
配制方法：先以二次水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加二次水至1000ml，充分摇匀。
该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。