动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定

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原理:   细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA与蛋白质解离，并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有：（1）用氯仿－辛醇混合液剧烈振荡，使蛋白质变性。（2）在冷的2mol/L盐酸胍溶液中沉淀RNA，大部分蛋白质仍处于溶解状态。（3）以去污剂如十二烷基硫酸钠（SDS）处理，使核蛋白解离，蛋白质变性。（4）以含水的酚溶液除去蛋白质。去污剂和酚均能抑制RNA酶活力，有利于制备核酸大分子。目前应用最广的是苯酚法。
以酚水两相系统分离RNA是将细胞或细胞器置于含有SDS的缓冲盐溶液中，加等体积水饱和的酚，通过剧烈振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相，被酚变性的蛋白质或溶于酚相、或在两相界面处形成凝胶层。实验所用的0.15mol/L缓冲盐溶液系统可使大部分核糖核蛋白解离，在用酚处理时脱氧核糖核蛋白变性；在低温条件下，从水相中除去，这样得到的RNA制品中混杂的DNA量极低。RNA制品继续用氯仿－异戊醇处理，可以进一步除去其中含有的少量蛋白质。最后用乙醇使RNA自水溶液中沉淀下来。
实验所得制品的核酸含量可用紫外吸收法和定磷法测定，然后用地衣酚显色法测定RNA含量，二苯胺显色法测定DNA含量，Folin－酚试剂法测定蛋白质含量。


详见WORD文档（动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定.rar）