选择合适的试剂并正确使用是转染成功的基础

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“工欲善其事，必先利其器”
――选择合适的试剂并正确使用是转染成功的基础

文/罗氏诊断应用科学部

通常情况下，哺乳细胞摄取并表达外源基因的效率很低，这主要是由于真核细胞的脂质双层膜是阻止带电荷分子进入细胞的巨大障碍。目前人们已开发了数种转染技术来克服这个障碍。有了这些技术后，采用DNA或RNA转染的方法来研究培养细胞中的基因表达就成为了生物学研究中的常规手段。
简而言之，转染是指将DNA、RNA、蛋白质或者其他大分子输送进入真核细胞内。使用转染技术的目的包括对基因调节以及蛋白质的表达和功能等进行研究。现已建立并完善了数种不同的技术，将各种分子，尤其是核酸输送进入真核细胞内。这些转染技术是基于三种不同的策略来实现的，即1）利用运送体分子，如磷酸钙、右旋DEAE糖苷，阳离子脂质体试剂和新复合组分的转染试剂；2）直接输送，如电穿孔、基因枪和显微注射；3）病毒载体。（详情请见www.roche-applied-science.com／transfection）。
并不是所有的转染技术都能适用于所有类型的细胞或实验。采用不同的转染技术在所能获得的基因表达水平方面差异很大。此外，没有一种单一的技术能够适合于转染实验所用不同细胞体系的多样性。每种转染技术都会有其自身的优点和缺点，而取决因素则包括，例如，需要转染的细胞类型（对于困难的细胞系尤其如此），需要被转染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质），或者甚至是对转染应用高通量的要求等。但无论在何种情况下，转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个要素。
为确保转染的高效性，需要选择一种可靠的转染技术及转染试剂，使之在相应的细胞培养条件下能够发挥最佳效果。为了选择最符合需要的转染试剂，首先需要检索有关所使用的特定细胞类型或使用方式的现有文献资料，考察不同试剂的特点；并且，如果可能的话，还要采用试剂所推荐的方案对几种不同的试剂进行测试。

细胞生理
为了研究细胞生理，或用细胞进行目标验证，要注意确保转染过程本身不会改变研究目标的效应途径，或者如果有所改变的话，其改变程度也应尽量减小。如果您所用的转染试剂对细胞有害，那么就很难区分所产生的效应到底是出自转染过程本身还是被转染的特定基因。正因为这个原因，一定要同时转染空载体或含有无关基因的载体作为空白对照。仅有如此您才能对目标基因所产生的效应做出准确的评价。
在进行转染时，在获得最佳的转染效率，应尽量减小相差显微镜下可见的细胞形态学变化。在使用FuGENE