免疫PCR的应用及发展

yujian623

免疫PCR的高敏感性使低于常规检测方法极限的痕量抗原的检测成为可能。但目前免疫PCR技术目前尚处于研究阶段，还没有一个十分成熟和满意的方法，配套试剂尚缺乏，所以应用的还不多，在报道的几种方法中均是用一些已知的标准品进行试验，主要用于检测肿瘤标志物、细胞因子、神经内分泌活性多肽、病毒抗原、细菌、酶、支原体、衣原体等微量抗原。Sano，Ruzicka和Hong zhou分别用牛血清白蛋白、小鼠IgG和重组人原癌基因产物ETS;蛋白作为待检抗原进行免疫PCR，他们的结果均表明免疫PCR的敏感性比ELISA高105倍，且PCR产生的背景信号很弱，可以检测到几百个分子的抗原，在理论上免疫PCR可以检测到一个分子抗原，因此，免疫PCR特别适用于检测一些含量特别少的抗原分子。
t2 z5 x. o0 s5 L4 W    目前介绍的免疫PCR还存在一些缺点，在报道的文献中均采用待检抗原直接吸附固相，这样固相的均质性必然对结果有很大的影响;同时检测的样品液中其它成分也可以吸咐固相，极易产生背景过高或精确度下降。( {& e7 D- @0 k1 T
    免疫PCR以现存检测无可比拟的高敏感性显示了巨大的优越性，必将在疾病的诊断中发挥巨大的作用。但目前该技术尚未完全成熟，免疫PCR过程中的每一环节都影响它的敏感性和特异性，因此探索最佳反应条件，简化步骤，降低费用，实现标准化，商品化生产，使之易于在基层推广至关重要。近年来国内外学者在这方面做了大量工作，其中新型连接分子是关键，随着基因工程、化学合成及二次杂交等技术的进步，双特异性抗体、双特异性重组蛋白、双特异性化学合成分子等新型连接分子的不断涌现，使抗体与DNA分子直接连接，为解决上述问题提供了有利条件。
& s' ?& z4 D\" [* w* O8 t$ @0 N# r    另外，有些难于吸咐固相的抗原也就不能用免疫PCR检测，连接分子的特异性和均质性对PCR影响很大，从理论上看Hong zhou的生物素标记抗体和DNA以及用游离的链亲和素连接抗体和DNA是一比较理想的方法，但是如能做到生物素化抗体、亲和素和生物素化DNA3个分子预先连接一个复合物，那么将简化实验过程。PCR扩增过程相对简单，如用微量板作为固相需选用配套的PCR仪，否则需将其移入反应管内，这必然导致很大的误差，经放大可产生显著差异。固相也可以直接采用某些PCR反应管，并且可以直接用一般的PCR仪进行扩增，但冲洗过程相对复杂一些。免疫PCR具有非广泛的应用前景，十分有必要进一步完善免疫PCR的实验过程和配套试剂的研制