基因工程实验指导

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基因工程实验指导
邢万金 扈廷茂 编写
2005年6月（第二次修订）
内蒙古大学生命科学学院生物系基因工程实验室

目 录
基因工程实验注意事项———————————————————————————（2）
实验流程参考图——————————————————————————————（3）
第一部分 质粒DNA的提取和酶切电泳鉴定
实验一 质粒DNA的小量制备———————————————————————（4）
实验二 质粒DNA电泳鉴定————————————————————————（6）
实验三 质粒DNA的酶切—————————————————————————（8）
第二部分 目的基因的获得和重组载体的构建
实验四 PCR扩增制备目的基因———————————————————————（10）
实验五 目的基因片段与载体连接——————————————————————（12）
实验六 从琼脂糖凝胶中回收DNxxx断———————————————————（14）
第三部分 感受肽细胞的制备和转化及筛选鉴定
实验七 感受态菌的制备——————————————————————————（16）
实验八 细菌转化—————————————————————————————（18）
实验九 转化克隆的筛选和鉴定———————————————————————（20）
第四部分 目的基因在原核细胞中表达与SDS-PAGE鉴定
实验十 外源基因的诱导表达————————————————————————（22）
实验十一 SDS-PAGE检测表达蛋白—————————————————————（24）
附 录
附录1：表达载体pET-His的相关资料————————————————————（27）
附录2：从NIH查阅的nattokinase（纳豆激酶）序列之一————————————（28）
附录3：本实验所用的克隆载体图——————————————————————（29）

附件为word版，图片不全，htm版请到http://biofrank.ttsite.com/read.php?tid=5641997下载

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