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[【经验与求助】] 淋巴细胞转化

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发表于 2007-11-14 19:03:25 | 显示全部楼层 |阅读模式
(1)原理:T淋巴细胞与有丝分裂原在体外共同培养时,受到后者的刺激可发生形态学和生物化学的变化,部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细胞,并进行有丝分裂,这种方法称为淋巴细胞转化试验(lymphocyte transformation test)。
(2)试剂:①1640培养液:广州威佳科技,临用前加入20%犊牛血清(灭活),青链霉素各100IU/ml,用5.6%NaHCO3(经高压灭菌)校正pH7.2~7.4,是为应用培养液。
②PHA溶液:上海伊华医学科技有限公司,批号:20040301。
③Hank’s液:贮存液:氯化钠80g;氯化钾4g;Na2HPO4•12H2O 1.52g;KH2PO4 0.6g;葡萄糖10g。加适量蒸馏水溶解后,加入0.4%酚红液50ml,再加蒸馏水至1000ml。置4℃冰箱中保存备用。临用前将贮存液用蒸馏水1:10稀释,用5.6%NaHCO3校正pH7.2~7.4。
④低渗溶液:KCL2.79g溶于蒸馏水500ml中。高压灭菌后备用。
⑤姬姆萨-瑞特氏混合染色液。
(3) 实验步骤:
①取2支试管分为试验管和对照管,各加入1640培养液3ml,犊牛血清0.5ml。试验管加PHA,对照管不加PHA。两管各加胶塞,于37℃恒温箱内培养72h,每天轻轻旋转混匀2次。
②将上述试管从温箱中取出,用毛细吸管吸出上清液弃去,于试管内加入低渗溶液5ml,轻轻冲打混匀、以2000rpm离心5min,吸弃上清液,沉淀物加Hank’s液5ml,再以2000rpm离心10min,吸弃上清液,用沉淀物涂片。
③用姬姆萨-瑞特氏混合染色液染色,在油镜下计数200个淋巴细胞,按下列公式计算淋巴细胞转化率。
淋巴细胞转化率=
④转化和未转化淋巴细胞形态学特征
由小淋巴细胞向淋巴母细胞转化的形态学改变的一般规律是:整个细胞和核都增大;胞浆比例加大,其嗜碱性增强;核质疏松,核内可见核仁;胞浆内有空泡形成等。
a.成熟的小淋巴细胞:其大小和形态与末梢血片中未经培养的淋巴细胞一致。核质致密,染呈蓝紫色。胞浆比例甚小,常在核的一边呈弯月形,染呈淡蓝色。
b.过渡型淋巴细胞:是处在转化过程的淋巴细胞,已开始具有淋巴母细胞的某些特征,其体积比成熟的小淋巴细胞增大,核较疏松,可见有核仁,胞浆增多,染呈蓝色。
c.淋巴母细胞:体积比成熟小淋巴细胞大3~4倍,核亦显著增大,核质疏松,有数个明显的核仁,核和胞浆常出现多个空泡。胞浆比例大,其外形不规则,嗜碱性明显增强。
d.核分裂相细胞:核体呈现有丝分裂,细胞内可见数对至数十对染色体。
以上b、c、d型均计入转化淋巴细胞类。
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