免疫组化几种溶液的配制方法

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1、PBS:
  取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。
  
2、TBS：
  2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）
  Tris（三羟甲基氨基甲烷）    60.57g
  1N HCL    约420ml
  双蒸水    加至1000ml
  Tris缓冲液配制方法：
   先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6， 最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。
  2.2 TBS配方：
  Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6）    100ml
  NaCI    8.5~9g (0.15mol/L)
  双蒸水    加至1000ml
  TBS配制方法：
  先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。
  
  3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：
  3.1 储存液：
  A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸（C6H8O7•H20）溶于1000ml蒸馏水中。
  B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7•2H20）溶于1000ml蒸馏水中。
  3.2 工作液：
  取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.00.1
  
  4、胰酶（Trypsin）：
  4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液：
  常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。
  4.2 ZLI-9010胰蛋白酶：
  取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。
  5、胃酶（Pepsin）：
4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。

  6、DAB：
  6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：
  使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。
  6.1 ZLI-9030 DAB：
  6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。
  
7、AEC：
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。

8、RIPA：
1×PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液（用量为10l/ml）
8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30l/ml）
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液
（用量为10l/ml）

9、Blotto A：
常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。

10、Blotto B：
与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。