非离子型表面活性剂在细胞染色中的应用

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表面活性剂作为一种新兴的化学试剂，在医学检验领域有着非常广泛的应用前景。可依其溶于水后分子的亲水基所带电荷分为离子型表面活性剂(阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂)和非离子型表面活性剂(水中分子不带电)。利用某些非离子型表面活性剂的增溶作用及不增加染料中电荷的特性，在含有染浆较好的瑞氏和染核较好的姬姆萨染料的迈-格-姬(MGG)染液中，分别加入高分子非离子型表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮K30 (Polyvinylpyrrolidone K30, PVP K30)、聚氧乙烯醚辛烷基酚(Triton-X-100)、含多元醇的吐温-20(Tween-20)和吐温-80(Tween-80)，与新旧MGG 染液一起，采用Dean，Gilliland等推荐的650 nm和525 nm的吸光度比值(rA)对上述6种染液质量进行鉴定，并观察其对血液、脑脊液、胸腹水、骨髓细胞染色效果，作了初步探讨。

　　一、试剂配制

　　1.MGG(旧)：瑞氏色素1.0g，姬姆萨色素0.5 g，甘油30 ml，加无水甲醇600 ml，溶解过滤。

　　2.MGG(新)：瑞氏色素1.0 g，姬姆萨色素0.5 g，甘油30 ml，研磨，加甲醇500 ml，摇匀溶解。

　　3.MGG+PVPK30：甲醇500 ml，加PVPK30 10.0g，摇匀溶解后，加瑞氏色素1.0g，姬姆萨色素0.5 g，摇匀溶解。

　　4.MGG+Triton X-100：甲醇500 ml，Triton X-100 10 ml，摇匀溶解，加瑞色氏素1.0 g，姬姆萨色素0.5 g，摇匀溶解。

　　5.MGG+Tween-20：甲醇500 ml，Tween-20 10 ml，摇匀溶解，加瑞氏色素1.0 g，姬姆萨色素0.5 g，摇匀溶解。

　　6.MGG+Tween-80：甲醇500 ml，Tween-80 10 ml，摇匀溶解，加瑞氏色素1.0 g，姬姆萨色素0.5 g，摇匀溶解。

　　7.pH 6.4～6.8磷酸盐缓冲液。

　　二、方法

　　1.染液质量观察：将上述染液各25 μl分别注入10 ml甲醇中(1∶400稀释)，各管混匀后，以甲醇为空白，以721分光光度计分别在波长650 nm与525 nm测定其吸光度，计算吸光度比值(rA)=A650/A525。

　　2.染色效果观察：(1)染色步骤：玻片上血膜自然干透后，加染液覆盖全膜，约30秒～1分钟，滴加缓冲液(染液与缓冲液的比例，血片、骨髓片为1∶1.5，脑脊液、胸腹水片为1∶2)，混匀后染色5分钟(骨髓片染色5～10分钟)，水冲洗数秒钟，待玻片干后镜检。 (2)染色判断标准：以图谱所描述的各类细胞着色情况为准，用6种染液对同批标本染色，判定效果。

　　三、结果

　　1.六种染液吸光度比值：旧MGG为0.97，新MGG为1.39，MGG+PVP K30为1.67，MGG+Triton X-100为1.65，MGG+Tween-20为1.73，MGG+Tween-80为1.76。新配制的添加非离子型表面活性剂的四种染液与新、旧 MGG染液染色效果相比，沉渣少，背景干净，细胞着色鲜明，结构清晰。

　　四、讨论

　　1.MGG染液中，含有带负电荷的伊红和带正电荷的美蓝、天青。采用非离子型表面活性剂，以增加染料的溶解度与稳定性，而不改变染液中的电荷数。

　　2.全国临床检验方法学学术研讨会推荐以吸光度比值作为瑞氏染液成熟的指标，该比值大于1即可使用。我们将此指标试用于MGG染液，加入PVPK30和Triton X-100的MGG，吸光度比值分别为1.67、1.65，加入Tween-20和Tween-80的MGG，其吸光度比值分别为1.73、1.76。

　　3.四种添加非离子表面活性剂的染液与新、旧MGG染液相比，细胞色泽艳丽，清新自然，缩短了染色时间，并可配后立即使用。

　　4.按照非离子型表面活性剂的亲水亲油平衡值(HLB)，，非离子型表活剂的HLB大都介于0～20之间，大于15可作增溶剂。四种染液中添加的非离子型表面活性剂均接近或大于此值，均有增溶作用，可省去研磨时间，增加染料的溶解度，减少染料沉渣，促进染液成熟。