PCR克隆揭开全新的篇章—靶向克隆法

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PCR克隆揭开全新的篇章—靶向克隆法

靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该方法的主要特点是：①无需传统基因克隆所需要的限制性内切酶和连接酶，使基因克隆位点选择的限制性减少；②易克隆长片段，能够克隆长达12Kb的基因片段； ③克隆效率高，转化率高； ④克隆所需时间大大缩短，可以在一天之内完成从PCR开始到转化的全部过程；⑤阳性克隆不存在方向相反的问题，百分之百的正向连接。
靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。如果实验顺利，2－3天即可得到研究人员所需要的克隆。而传统的克隆方法由于需要寻找与需要克隆的基因和载体相适应的限制性内切酶位点、连接酶连接以及挑选方向正确的阳性克隆等原因，整个过程需要两个星期到三个月不等，有时由于找不到合适的限制性内切酶位点，甚至根本无法克隆研究人员感兴趣的基因.靶向克隆酶将为基因克隆技术带来一场革命性的变革。
◆靶向克隆酶特点
 准确、定向克隆PCR扩增的基因片段
 可克隆长达12Kb的基因片段
 操作简单，将混合物25℃孵育30min即可转化
 无需限制性内切酶
 不用去磷酸化载体，无需连接酶
 适用任何类型的克隆载体、插入片断和酶切位点
 只要线性化载体就行（单酶切、双酶切均可）
 可使用任何类型的Taq酶（常规Taq、各种高保真酶均可）的扩增产物
 克隆效率高，转化率高
 重复性高、可靠性好—可用于高通量操作，批量克隆