眼球火棉胶包埋切片

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制作眼球切片，当以火棉胶包埋法为佳，但做活检常规检查时，用火棉胶包埋法不但费时甚久，而且切片过厚（10um），不能做细菌或其它特殊染色。因此不能满足某些需要。若以普通之石蜡包埋切片，则眼球经二甲苯及浸蜡等处理，收缩过甚，而使视网膜有折卷脱位现象，切片亦破碎不整，各层次之间的联系紊乱。为防备此弊端起见，无论行火棉胶或是石蜡包埋，在开始固定时即非常注意。固定整个眼球，先在眼球旁开一个小窗，以Bouin液固定2～4天，火棉胶包埋则需要 10％福尔马林固定。脱水应该从50％酒精开始，更换脱水剂时，避免直接用液体冲击眼球，最好先将眼球取出，待溶液入瓶后，再轻轻将眼球放入瓶内。
二、石蜡包埋切片法：
1.整个眼球以Bouin液固定2～4d。
2.50％酒精24h，切开眼球继续脱水。
3.60％～95％各级酒精脱水各12h。
4.纯酒精12h（更换一次）。
5.香柏油透明4～6h。
6.再以二甲苯透明2h。
7.二甲苯及56摄氏度软蜡等量混合液浸入30min。
8.浸56摄氏度石蜡2h，再浸58～60摄氏度石蜡1h。
9.常规包埋，制片。
经过以上处理的眼球，如果刀片锋利，可得到较满意的完整的6～8um切片。
三、火棉胶包埋法
celloidin包埋常用于大块组织的包埋，可避免纤维组织和肌肉组织的过渡硬化，减少纤维组织的收缩和扭转，利于保持原有组织结构，相对较费时，切片较厚，价格也较贵。一般过程如下：
1. 组织块经过固定（时间根据组织类型确定，眼球一般固定12～24h，气温低时适当延长）水洗后入50％和60％酒精各6～12h。
2. 70％、80％和90％酒精各6～24h。
3. 95％和100％酒精各12～24h。
4. 乙醚和100％酒精等量混合液24h。
5.2％火棉胶液（2g火棉胶，50ml乙醚，50ml纯酒精）24～48h。
6. 4％火棉胶液（4g火棉胶，50ml乙醚，50ml纯酒精）24h至数周。
7. 8％火棉胶液（8g火棉胶，50ml乙醚，50ml纯酒精）24h至数周，使其浸透饱和。
8.16％火棉胶液（16g火棉胶，50ml乙醚，50ml纯酒精）一周。
9.用足量16％或30％火棉胶液倒入平底玻璃器皿，组织平放，埋于其中，用盖遮挡并略留出缝隙，使其缓慢蒸发，用手指轻压火棉胶不出现指纹时硬度即可。注意挥发过快胶内会产生气泡。
10.倒入2倍氯仿使其硬化12～24h。
11.修去组织周围多余的火棉胶，浸入浓度为80％的酒精中硬化6h。
12.将胶块底面和木快同时浸入乙醚、酒精混合液，稍溶后，加少许胶，使胶块和木快粘合，待乙醚、酒精挥发后放入浓度为80％的酒精液中使其硬化，即可切片，包埋好后的组织块可存放人浓度为70％的酒精液内。
火棉胶切片法：刀片锋利，一般切片厚度大于或等于10um，切好的胶片应先放在浓度为70％或80％的酒精液中，而不立即贴在载玻片上，余下的胶块也应保存在浓度为70％的酒精液中，防止火棉胶继续挥发影响硬度。
四、火棉胶切片粘片法：
1.蛋白甘油粘片法： 切片放在涂有薄层蛋白甘油的载玻片上，用滤纸吸干，加几滴丁香油，放置数分钟，用滤纸沾去丁香油，经95％酒精和蒸馏水冲洗，即可染色。
2.明胶粘片法： 明胶4g溶于20ml冰醋酸，在65～70摄氏度水浴内加温荣华，加70％酒精70ml和5％铬矾水溶液1～2ml。将以上混合液滴在载玻片上，干燥后即形成一层明胶薄膜，遇水后明胶薄膜略有溶化，产生一定黏性，将切片贴附。
3.火棉胶粘片法： 将切片从70％酒精转移到载玻片，展平后滤纸吸干，在切片上涂一层0.5％的火棉胶溶液，蒸馏水洗后染色。
五、热修复
理论上关于抗原修复的问题仍未清楚，提高抗原-抗体阳性检测率的同时可以出现假阳性。
1.微波处理：在250ml塑料盒内加入200ml buffer，在微波高档加温至96摄氏度左右（大约1～2min），将切片插入25片塑料架上，移入修复液中，微波4挡20min 96摄氏度左右，取出后自然冷却至室温。
2.水浴锅法：热水浴是一种传统的抗原修复方法，调节水温使标本达95摄氏度左右，将切片置于内含200ml buffer的塑料盒内，温度平衡后开始计算时间20min，取出塑料盒后自然冷却至室温。
3. 压力锅法：该法需要购置一个不锈钢压力锅，并在高压锅内加入一定量的buffer，开始在煤气灶上加温至煮沸，将切片插入切片架并置入锅内，盖上锅盖，不加阀，开始冒气时计算时间5min，关闭气阀，使之加压10min。压力锅置于流水槽中冲洗10min，冷却后取出切片，PBS洗。