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[【经验与求助】] 大豆基因组DNA的提取

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发表于 2007-6-30 09:37:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
将从田地里采回的新鲜大豆叶片保存在-80度的冰箱,等到要用时,将其取出。
1、称取大豆叶片2克左右,放入研磨钵中,倒入液氮,将其研碎成粉末。
2、将粉末装入50ml的离心管中;同时,将CTAB提取液放入水浴锅中,水浴加温至65度。
3、吸取10ml的CTAB提取液和200ul的巯基乙醇放入装有叶片粉末的离心管中。
4、充分振荡后,放入65度的水浴锅中,大约40分钟;其间,每隔10分钟轻轻的摇晃离心管,使溶液和粉末充分混合。
5、待时间到后,将其拿出,放置在空气中冷却至室温,加入等体积的氯仿异戊醇(24:1),充分混匀。
6、然后将离心管放入离心机中离心,转速12000rpm,时间大概15分钟,即可。
6、吸取上清液至另一离心管中,再吸取等体积的氯仿异戊醇,混匀离心,重复上述步骤。
7、再一次吸取上清液,加入2倍于该上清液体积的冰无水乙醇,轻轻混匀(因为此时DNA已有少许絮状沉淀,避免DNA断裂),放入4度冰箱中,大概1小时左右。
8、将DNA沉淀用玻璃器皿将其挑到1.5ml的离心管中,用70%的酒精清洗两遍,放置室温中,待其酒精味挥发完之后(用鼻子闻闻),加入TE溶液即可,这就是DNA原液,放入-20度冰箱保存即可。
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