赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成

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一、原理

  淀粉性种子在萌动过程中，胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引起α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。通过碘试法比色测定淀粉在酶催化反应过程中的消耗量，可以定量分析α-淀粉酶的活力。

  二、材料、仪器设备及试剂

  （一）材料：大麦、小麦种子
  （二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 恒温箱；3. 水浴锅；4. 移液管；5. 烧杯；6. 试管；7. 青霉素小瓶；8. 镊子；9. 刀片。
  （三）试剂：1. 1%次氯酸钠溶液；2. 0.1%淀粉溶液；3. 2×10–5mol/L、2×10–6mol/L、2×10–7mol/L、2×10–8mol/L 赤霉素溶液；4. 10–3mol/L 醋酸缓冲液；5. I2-KI溶液。

  三、步骤

  1. 选取大小一致、健康的大麦种子50粒，用刀片将每粒种子横切成两半，使成无胚的半粒和有胚的半粒，分别置于新配制的1％次氯酸钠溶液中，消毒15min，取出用无菌水冲洗数次，备用。
  2. 取小瓶6只编好号码，按表（详教材）加入各种溶液和材料，于25℃下培养24小时（最好进行振荡培养，如无条件，则必须经常摇动小瓶）。
  3. 淀粉酶活性分析：从每个小瓶中吸取培养液0.1mL，分别置于事先盛有1.9mL淀粉磷酸盐的溶液中，摇匀，在30℃温箱或水浴中精确保温10min，然后加I2-KI溶液2mL，蒸馏水5mL，充分摇匀，于波长580nm下测定吸光度，以蒸馏水为空白校正仪器零点。读数，从标准曲线查得淀粉含量，以被分解的淀粉量作为淀粉酶的活性。
  4. 以不同淀粉浓度（0～7μg/L）或淀粉量（0～100μg）及其吸光度绘制标准曲线。

  四、结果计算

  1. 第1瓶为淀粉的原始量（X）。
  2. 第2～6瓶分别为反应后淀粉的剩余量（Y）。
  3. 淀粉水解量=[（X—Y）/X]×100%。