细胞化学染色分类技术

yujian623

染色技术是分类白细胞的经典依据，但瑞氏染色这类形态学复合染色不能被自动分析所模拟。一般光学技术只能测到光强等量的参数，而不能测得波长等属性的参数。因此，自动分类就要求用单染来甄别。

　　过氧化氢是生物氧化还原反应的最重要氧化剂，在吞噬过程中广泛应用。因此，可以根据细胞过氧化氢酶染色来推断白细胞的吞噬功能强弱，并结合细胞的大小，从而将白细胞分为：高过氧化氢酶的嗜酸性粒细胞、次之的中性粒细胞、较弱单核细胞以及没有过氧化氢酶的淋巴细胞和嗜碱性粒细胞四类。从而达到分类的目的。由于一般嗜碱性粒细胞很少，因此没有过氧化氢酶的细胞可以近似的认为是淋巴细胞。

　　方法：将血加入到含有清洗剂和甲醛的高渗液体内，其中清洗剂（含非离子活性剂）使细胞破坏，甲醛使白细胞浆内酶被固定。此后加入过氧化氢和4-氯-萘酚、加热，如果待检细胞浆中含有过氧化氢酶即可分解过氧化氢产生[O]，后者可使4-氯-萘酚显色并沉积定位于酶反应部位。细胞通过测试区时，由于酶显色不同和细胞大小的差异，激光束射到细胞上前向角和散射角不同。以X轴为吸光率标记（酶反应强度），Y轴为光散射（细胞大小），每个细胞产生的两个信号，即可将白细胞分为四类。

　　由于淋巴细胞和嗜碱性粒细胞没有过氧化氢酶所以不能分开，为了解决嗜碱性粒细胞的测定问题，一般采用碱性溶剂将其他白细胞溶解，用体积法测得嗜碱性粒细胞。