细菌蛋白质的透析体会

yujian623

做原核表达，蛋白表达在细菌的周质腔。提取的方法是用冻融加高渗裂解，可溶的蛋白在裂解液中。纯化上柱前需要用透析袋在1XPBS中透析。做了几次，逐渐有了些体会，敲在这里和大家探讨。
透析袋的处理，按照分子克隆上的方法，先后用碳酸氢钠和EDTA处理即可使用。不过对于透析袋的选择一定注意分子量的范围。我表达的蛋 白大小是22kd,选择的透析袋是绿鸟的，分子量7000。要注意的是7000只是一个大致的数值，会有一定的误差。也许，分子量8000的分子也能够透析出来。透析袋的长度可以根据需要透析的液体量来定。一般不要太短。因为两端用夹子封闭要占用一定距离，等于你的可用空间缩短了。而且夹子夹住的地方，很可能会有缝隙，使你的蛋白样品丢失。我用的长度一般是25--50CM.
关于每次样品的透析量，加入透析袋中，应该大致使透析袋留有大约三分之一的空间。否则，溶液体积的迅速膨胀，可能会使透析袋破裂，损失可就大了。而且，透析袋使用时，要求不要成角，也是为了防止局部压力过大导致破裂。如果空余够多，这点也就不是问题了。
1XPBS的更换，最初要频繁一些，大概1- 2个小时一次，更换三四次后，可以间隔三四个小时换一次。有一点值得留意，那就是透析袋内的液体体积增加的是否迅速和明显。如果不是，那么，提示其中的蛋白浓度不高，可能你的裂解过程不够彻底，自然你的目的产物就不会多。虽说是周质腔的可溶蛋白，各种蛋白加在一起，也是多种多样的。因此，没有体积的明显增加，透析这种高渗体系中的蛋白就失去意义了。我的高渗裂解液的主要成分是20% 蔗糖，但我发现只把裂解液放在透析袋中，体积基本不会增加。