流式细胞仪检测细胞周期测定

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应用：  通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数，可检测细胞的增殖、凋亡。
原理：  通常用PI染细胞核，PI在一定波长的光下发出荧光，其强度与DNA含量成正比。绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物，分选细胞。

方法：
1）  将细胞以1×106接种于60mm培养板，80％汇合后转染。
2）  24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素（真核表达载体上的抗性标记）进行培养（该步可选）。
3）  48－72小时后用胰酶消化收集细胞，PBS洗两遍，弃上清，加入1ml 70％预冷乙醇中，吹打均匀，4℃固定12小时以上。
4）  PBS洗涤去乙醇，1000rpm, 5min，洗两遍。
5）  0.5mlPBS重悬细胞，加入PI和 RNaseA至终浓度50礸/ml，37℃ 温浴30 min。
6）  用流式细胞仪测定周期。

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。
RNaseA：10mg/ml